小鼠次氯酸(hypochlorous acid)ELISA KIT 

竞争法
货号:BES6897K 

规格:96T 本试剂盒仅供研究使用。 

使用目的: 

本试剂盒用于测定相关液体样本中次氯酸(hypochlorous acid)的含量。 

实验原理 

本试剂盒应用免疫竞争法测定标本中次氯酸(hypochlorous acid)水平。用纯化的次氯 酸(hypochlorous acid)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入次氯酸 (hypochlorous acid),和 HRP 标记的次氯酸(hypochlorous acid)抗原,使它们竞争结 合,,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。样本颜色的深浅和样品中的次氯酸(hypochlorous acid)的含量呈负相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计 算样品中次氯酸(hypochlorous acid)的含量。

试剂盒组成

标本要求 

1.标本处理:

(1)水样 采集后经 -20℃反复冻融三次,再经玻璃纤维过滤后,备查 

(2)组织 样品用丁醇:甲醇:水(5:25:70 V:V:V)抽提,或按相 关文献提取进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,备查 

2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 

操作步骤 

1. 加样:分别设标准孔、空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、 待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加 50 微升,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl, 然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 

2. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。 

3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。 

4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。 

6. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15 分钟. 

7. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 

8. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

计算 

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即 为样品的实际浓度。 

注意事项 

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。 

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 

4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值 小于标准品孔第一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计 算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 

6.底物请避光保存。 

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 

9.本试剂不同批号组分不得混用。 

检测范围:

0.3ng/ml -18 ng/ml 

保存条件及有效期 

1.试剂盒保存:;2-8℃。 

2.有效期:6 个月